貼壁細(xì)胞傳代過(guò)程

貼壁細(xì)胞傳代過(guò)程：

1：對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，它需要把上清去掉，用1-2ML的PBS洗一下細(xì)胞，然后用槍吸去洗滌液，然后加入胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。（加入1-2ML的PBS， 我是會(huì)貼壁加入到培養(yǎng)皿的邊緣，不能直接對(duì)著細(xì)胞加入PBS，容易把細(xì)胞都吹起來(lái)。這一步的目的是為了去掉殘余的培養(yǎng)基的，殘余的培養(yǎng)基會(huì)含有血清和一些離子等，不利于接下來(lái)的消化。此外，常見(jiàn)的是0.25%的胰酶。一般根據(jù)細(xì)胞皿的大小加入胰酶，對(duì)于10cm的dish，我會(huì)加入1ml的胰酶。）

2：放到37攝氏度培養(yǎng)箱30s-1min（我這里處理的是293T細(xì)胞，不同的細(xì)胞的消化時(shí)間是不一樣的，需要具體的去查一查，如果消化的好的細(xì)胞是會(huì)呈現(xiàn)流沙狀態(tài)的，上下晃動(dòng)都會(huì)隨著移動(dòng)的。）

3：加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化，用槍把培養(yǎng)液吹勻。（因?yàn)楹醒蹇梢越K止胰酶的消化反應(yīng)，用槍吹培養(yǎng)皿底是為了把殘留在底部的細(xì)胞吹起來(lái)）

4：轉(zhuǎn)移到15ml的離心管中，離心，200g 5-10min(一般我是1000rpm離心3min)

5：去掉上清液，然后用PBS 重懸細(xì)胞，加入的PBS的量是10ML。再次離心，去掉上清。

6：加入適量的培養(yǎng)基，把細(xì)胞重懸，然后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿里面。放入到37攝氏度的5%的二氧化碳培養(yǎng)箱。